Desenvolvimento de testes moleculares para a detecção do complexo Mycobacterium Tuberculosis e de outras micobactérias de importância clínica
Autor: Yasmin Castillos de Ibrahim das Neves (Currículo Lattes)
Resumo
As micobactérias incluem espécies patogênicas de relevante impacto para a saúde humana, como o Mycobacterium tuberculosis, agente etiológico da tuberculose (TB) e os patógenos oportunistas do grupo de micobactérias não-tuberculosas (MNT). Apesar dos esforços globais para reduzir a transmissão do M. tuberculosis e melhorar o diagnóstico laboratorial da TB, ainda existem cerca de 2,5 milhões de casos de TB anuais não diagnosticados e não tratados. Paralelamente, os relatos de doenças pulmonares causadas por MNT (DP-MNT) têm aumentado mundialmente, agravando o cenário diagnóstico e epidemiológico das doenças causadas por micobactérias. O diagnóstico diferencial entre TB e DP-MNT é desafiador, pois ambas as doenças apesentam manifestações clínicas e achados radiológicos semelhantes, frequentemente resultando no diagnostico errôneo das DP-MNT como TB. O diagnóstico laboratorial convencional apresenta limitações significativas, que comprometem o manejo terapêutico e levam a necessidade do uso de métodos moleculares como alternativa tecnológica para maior especificidade e rapidez na identificação da espécie infectante. No entanto, a utilização desses métodos ainda é restringido pelo alto custo e/ou dependência de insumos importados. Visando ampliar as opções diagnósticas, esta tese desenvolveu e validou dois testes moleculares: o BiDz-TB/NTM e o Multi-Detect MTB/NTM, para a detecção de micobactérias e a diferenciação entre o complexo M. tuberculosis e as principais espécies de MNT clinicamente relevantes (M. avium, M. kansasii, complexo M. abscessus e/ou M. intracellulare). O BiDz-TB/NTM apresenta um princípio inovador, baseado no uso de sensores desoxirribozimas binários (BiDz), e o Multi-Detect MTB/NTM se baseia na técnica de Real-Time PCR utilizando sondas TaqMan. Para o desenvolvimento e avaliação dos testes, foram realizadas análises in silico para selecionar alvos moleculares, ensaios de padronização e otimização das condições de amplificação e hibridização e a avaliação dos parâmetros de acurácia diagnóstica. Um painel de DNAs genômicos totais de 19 espécies bacterianas previamente caracterizadas foi utilizado. Os resultados obtidos demostraram que os alvos projetados possuem desempenho robusto na identificação do gênero Mycobacterium spp. e das espécies-alvo, apresentando alta sensibilidade, especificidade e acurácia. Os resultados alcançados nesta tese indicam que os testes propostos, no seu formato final, poderão contribuir para ampliar as opções diagnósticas atualmente disponíveis, sobretudo em regiões com limitações financeiras, reduzindo o tempo de resposta diagnóstica e melhorando o manejo da TB e das DP-MNT.