APERFEIÇOAMENTO DE MÉTODO PARA QUANTIFICAR CÉLULAS SENESCENTES EM TECIDO ADIPOSO BRANCO EM CAMUNDONGOS C57Bl/6

Autor: Ana Paula Furtado Carneiro da Fontoura (Currículo Lattes)

Resumo

As células senescentes (SC) são aquelas que pararam de se replicar e reduziram sua função fisiológica, porém não foram excluídas do organismo por apoptose. São presentes em vários tipos celulares e caracterizadas por secretarem uma variedade de moléculas pró- inflamatórias. Para poder identificar as SCs, um dos biomarcadores utilizados, é a atividade da beta galactosidase através do método de X Gal staining. Estudos mostram que, as SC acumulam-se com o envelhecimento em vários tecidos. Além disso, a eliminação dessas células, através dos senolíticos (quercetin e dasatinib) mostrou aliviar as condições relacionadas ao envelhecimento, como por exemplo diabetes mellitus tipo 2 (DM2). Diante disso, o objetivo geral dessa pesquisa é: Comparar e padronizar os métodos de quantificação de células senescentes para tecido adiposo em camundongos. Os camundongos de linhagem C57Bl/6, foram separados em 2 grupos: C57Bl/6 com placebo e C57Bl/6 com coquetel senolítico. Nas idades de 6, 12 e 18 meses, serão coletados órgãos de 8 animais de cada grupo de tratamento (depósitos de tecido adiposo branco). Para quantificar as SC e analisar sua morfologia, os órgãos serão corados com X-Gal e preparados para microscopia, através dos métodos: compressão do tecido adiposo entre duas lâminas e para os demais órgãos, corte com criostato e parafina. Na análise dos dados, será utilizado o Teste T de Student e Análise de Variância de uma e duas vias (ANOVA) através dos programas: Microsoft Excel e GraphPad Prism. Portanto, espera-se que manter baixo o número de células senescentes em órgãos que regulam a homeostase da energia retarde o aparecimento de doenças metabólicas crônicas, aumentando assim o tempo de vida saudável.

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