SOBRENADANTE DE Lactobacillus acidophilus ATCC 4653: ANÁLISE FISICO-QUIMICA E AÇÃO LARVICIDA SOBRE Toxocara canis
Autor: Carolina Netto de Oliveira da Cunha (Currículo Lattes)
Resumo
CUNHA, C.N.O. SOBRENADANTE DE Lactobacillus acidophilus ATCC 4356: ANÁLISE FISICO-QUÍMICA E AÇÃO LARVICIDA SOBRE Toxocara canis 2023. Dissertação (Mestrado) - Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde. Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Rio Grande, Rio Grande, RS. Introdução: A toxocaríase é uma antropozoonose parasitária negligenciada. Na busca por métodos de controle, estudos que avaliam o efeito de probióticos têm mostrado resultados promissores. A partir de estudo anterior realizado por nosso grupo de pesquisa, foi possível observar que o sobrenadante do probiótico Lactobacillus acidophilus ATCC 4356 promoveu morte de 100% das larvas de Toxocara canis no teste in vitro. Assim, opresente estudo visou investigar características do sobrenadante de L. acidophilus ATCC 4356 que possam estar envolvidas no efeito larvicida sobre Toxocara canis. Materiais e Métodos: Considerando que o ácido lático está entre os principais metabólitos de L. acidophilus, inicialmente foi avaliado se a forma de cultivo interfere na concentração deste ácido orgânico no sobrenadante. Para tal, foram realizados diferentes cultivos de L. acidophilus ATCC 4356, com diferenças quanto ao meio de cultura, à temperatura e ao tempo de cultivo. O sobrenadante obtido foi filtrado e quantificado por cromatografia liquida de alta eficiência (HPLC). Foi também avaliada a concentração de ácido acético, por HPLC, o pH e os níveis de peróxido de hidrogênio, por volumetria de oxidorredução, no sobrenadante puro e em diluições seriadas (1:2 até 1:128). Para a avalição do efeito larvicida, larvas de T. canis foram cultivadas em meio RPMI 1640 juntamente com o sobrenadante puro ou diluído em placa de 96 poços, em triplicata. Como controle de larvas mortas foram utilizadas larvas congeladas a -20oC e submetidas a choque térmico à 60oC e, como controle de larvas vivas, foram usadas larvas cultivadas em meio MRS ou RPMI 1640. A placa foi incubada em estufa a 37ºC com 5-10% de CO2 por 48 horas e, após, foi adicionado o marcador de viabilidade celular azul de tripan, tendo sido realizada a leitura em microscópio óptico. Resultados: A forma de cultivo não alterou significativamente a concentração de ácido lático no sobrenadante, sendo observada uma concentração máxima de 19,1 g/L. Em relação ao ácido acético, foi observada uma concentração de 5,0 g/L no sobrenadante puro. Foi observado um pH ácido de 3,8 quando o sobrenadante foi avaliado puro, mantendo-se ácido nas diluições de 1:2 até 1:16. Quando avaliado nas diluições 1:32 até 1:128 o pH estava neutro. Em relação a análise dos níveis de peróxido de hidrogênio, o valor encontrado foi inferior a 14,0 mg/L na amostra do sobrenadante puro. No teste in vitro, mesmo após ser diluído 1:2, foi observada uma ação 100% larvicida do sobrenadante sobre Toxocara canis. Conclusões: A partir dos resultados obtidos, pode-se sugerir que a presença de concentrações mais elevadas de ácido lático e a acidez do sobrenadante puro e diluído 1:2 estão relacionados à ação larvicida sobre Toxocara canis. O sobrenadante L. acidophilus ATCC 4356 diluído 1:2 parece ser a melhor opção, uma vez que mantém as características de acidez e a ação larvicida.